为克服单克隆抗体的局限性，科学家开发出双特异抗体（Bispecific antibodies,bsAbs），即含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，在靶细胞和功能细胞（分子）之间架起桥梁，从而介导相关生物学反应。如安进公司的双特异抗体Blinatumomab，是第一个被FDA批准上市的双特异抗体，其靶向B细胞和T细胞（CD19×CD3），通过募集T细胞治疗急性B淋巴细胞白血病。

但Blinatumomab等双特异抗体药物也存在一些问题，如生产困难、半衰期短（小于2小时），给药途径复杂（持续微泵28天）、稳定性差、溶解性差等。Ugur Sahin的研究小组为了克服这些困难，采用了体外转录（IVT）mRNA，体内内源合成双特异抗体的方法，取得了重要突破，文章发表在Nature Medicine上，题为 “Elimination of large tumors in mice by mRNA-encoded bispecific antibodies.”

文章解析

第一步，对IVT bsAbs的mRNA进行核苷酸的修饰，目的是提高稳定性和减弱抗原性：引入1甲基假尿嘧啶核苷酸。bsAbs一个靶向CD3，另一个靶向肿瘤相关抗原（TAA）—CLDN6，CLDN18.2和EpCAM。

第二步，验证了IVT bsAbs能在细胞中（K562）正常表达，并且表达的bsAbs能激活T细胞，特异杀伤表达TAA的肿瘤细胞。

第三步，发现静脉注射polymer/lipid转染IVT bsAbs在体内主要由肝细胞表达，其半衰期延长至数天，并且稀释的血浆具有抗肿瘤细胞活性。

第四步，发现IVT bsAbs能显著抑制卵巢癌实体瘤的生长，肿瘤组织中浸润的T细胞明显增多。

第五步，对IVT bsAbs的特异性和安全性进行检测。发现CD3×CLDN6对CLDN6ˉ的野生型ES-2卵巢癌细胞没有影响，却显著抑制稳定表达CLDN6的ES-2。

同时IVT bsAbs在体内不促进促炎因子的释放，无肝毒性。

荷叶点评

一、不足之处

1、IVT混合polymer/lipid转染在各组织器官的分布没有深入研究。

2、肾毒性和遗传毒性没有涉及。

二、荷叶认为该文能发表在Nature Medicine上原因有：

1、双特异抗体是肿瘤靶向治疗的热点，是最前沿，是国际上各大制药厂重点布局产业，是知识产权密集的地带，一个突破就会引人注目。

2、本文另辟蹊径解决了双特异抗体的一些重要不足，如半衰期，生产工艺等等，给人以耳目一新的感觉。

三、对荷叶的启示

1、研究技巧上，从体外实验到体内实验，从细胞实验到动物实验，同时注意研究的严谨与完整性，如为了证明IVT技术的可靠，设计了三个TAA的四种bsAbs。

2、研究思路上，读完这篇文章不禁想到，我们能否利用嗜肝的腺相关病毒在肝细胞中更特异表达双特异抗体呢，比IVT是否更好操作呢？（荷叶没查资料，瞎想）。

3、要发表好的文章最重要的还是要好的idea。这篇文章荷叶看到的是作者紧盯最前沿，发现最前沿的问题，积极开拓思路去解决问题。

4、回过头再看这篇文献，发现最难的地方就是第一步，如何合理修饰核苷酸，避免其免疫源性是关键的环节。查阅作者相关文献，发现Ugur Sahin在早在2014年就提出工程化mRNA在体内合成双特异抗体克服外源重组双特异抗体的缺陷的假说。从这里荷叶看到了他们坚持自己的想法，持之以恒的研究精神。

参考文献：

Stadler CR, Bähr-Mahmud H, Celik L, Hebich B, Roth AS, Roth RP, Karikó K, Türeci Ö, Sahin U.Elimination of large tumors in mice by mRNA-encoded bispecific antibodies.Nat Med. 2017 Jul;23(7):815-817.

doi: 10.1038/nm.4356. Epub 2017 Jun 12.

PMID: 28604701