中国企业研制埃博拉检测试剂检测准确率100%

来源：中国经济网   发布者：王楠   日期：2015-01-29  

世界卫生组织1月15日发布的最新报告显示，在西非受埃博拉疫情影响最严重的3个国家中，感染病例增速在前几周开始出现明显的放缓趋势。报告称这是一个乐观的信号。 全球都在为抗击埃博拉疫情奋战，每一分努力，都是为了成就一份生命的希望。在我国，去年11月25日，国家食品药品监督管理总局正式批准了我国首批3家企业的埃博拉病毒检测试剂产品投入疫情防控。其中，来自深圳市桃花源科技创新园的深圳市普瑞康生物技术有限公司因在埃博拉疫情面前的快速应急反应以及病毒检测100%的准确率，引起了国内外的广泛关注。 面对如此“狰狞的”病毒，远离疫区的中国医学家们，是怎样在埃博拉病毒检测能力上实现历史性的突破？ 埃博拉病毒形似中国古代的“如意”，呈现一般纤维病毒的线形结构，属丝状病毒科。据介绍，本次造成疫情的扎伊尔埃博拉病毒的致死率最高可达90%。病毒潜伏期长、早期症状不明显，且目前尚未有有效的疫苗和药物，只能对疫情进行防控。 “埃博拉病毒和其他病毒一样，有自己独特的一段DNA片段，就像一个数字序列号。这也是它的一个‘身份证’。检测埃博拉病毒时，只要找到这段DNA片段，通过我们自主研发的荧光PCR（聚合酶链式反应）复合探针技术，就能准确对病毒进行辨识。”据普瑞康公司总经理助理吴旭介绍。 2014年4月2日至15日，根据埃博拉病毒的靶基因，普瑞康很快设计出十几对引物探针并构建假病毒。通过检测假病毒对引物、探针进行筛选和优化，仅用半个月时间，普瑞康就确定了PCR反应体系及建立企业参考品。5月4日至6日，普瑞康即生产出埃博拉病毒试剂盒样品。 “项目过程中的关键问题在于样本的来源问题。由于埃博拉病毒自身具有很高的传染性和致死率，在我国国内又没有爆发过，这也使得我们没有任何真实的病毒来源。因此科研样本的来源成为影响课题进展的重要障碍。”普瑞康公司研发部研发总监孙晓彦博士指出。 2014年5月7日至26日，研究团队展开埃博拉病毒试剂盒性能的研究，包括灵敏度分析、特异性分析、干扰物评估、稳定性研究以及不同机型检测性能评估。 “科技攻关离不开技术创新。”孙晓彦表示，此次埃博拉病毒检测试验与生物信息学技术相结合，进行了虚拟试验。通过NCBI等生物信息学网络资源，分析和下载数量足够的埃博拉核酸序列，利用多个生物信息学软件对这些序列进行分析，发现其中较为保守的区域，然后把这些区域与其他病毒进行比较寻找其中较特异的序列，设计引物，以电子克隆的方式考察可能进行反应的特异性和扩增能力。 据孙晓彦介绍，由于国内没有样本，必须先构建可以利用的假病毒来代替样本进行相关试验。于是研究团队通过DNA合成，连接酶链式反应等技术进行分离、筛选、拼接、合成目的片段的DNA片段，通过测序验证以后，将其连接到载体上，然后将其导入膜外壳中，构建含有扩增片段区域序列的不具有感染能力的埃博拉病毒样颗粒。由于其在结构和基质上和病毒样本接近，并且含有扩增片段，因此可以部分代替相关病毒，对试剂盒的反应条件、分析性能进行相应的评估。 “埃博拉出血热的早期症状跟感冒十分相似，都会发热。我们先后联系了解放军疾病预防与控制所等部门，通过他们的协助，检验了试剂盒对于具有埃博拉出血热相似症状病人的临床样本的特异性和抗干扰能力。”孙晓彦说，“然后，我们和中国援助塞拉里昂医疗检测队联系，通过他们的帮助我们检测了353例临床标本，其中142例临床标本以中国援助塞拉利昂医疗检测队根据WHO公布的引物探针序列自行合成配制的试剂为对照试剂，无一漏检。” 2014年8月19日，普瑞康生物与军事医学科学院放射与辐射医学研究所共同研发的“埃博拉病毒核酸检测试剂盒”通过总后勤部卫生部专家评审，并获得正式生产批文，成为第一家获得权威部门颁发埃博拉病毒检测试剂产品生产批文的企业。 检测总量破千例、日检测量过百例，是衡量实验室能力高低和规模大小的重要指标，创造了多个“历史第一”，这标志着中国实验室能力水平已跻身世界先进行列 尽管研究团队通过模拟病毒的方式研发出“埃博拉病毒核酸检测试剂盒”，但还没有经过“真枪实弹”的临床考核。2014年9月16日，中国政府派出中国疾病预防控制中心移动实验室检测队，赴塞拉利昂开展埃博拉出血热检测工作，普瑞康的“埃博拉病毒核酸检测试剂盒”也被随行带往展开考核。 中国疾病预防控制中心移动实验室检测队抵达非洲后，首次接触到5份埃博拉送检样本。经中方实验室检测，5份可能感染埃博拉病毒的样本中有4份结果呈阳性、1份呈阴性。这与样本提供方——南非驻塞拉利昂的拉卡实验室的原始检测记录结果相一致。为确保检测结果准确，中方实验室先后采取4种方法进行检测与复检，检测结果前后完全一致。 中国疾病预防控制中心副主任高福指出，此次样本测评验证了中方实验室的检测能力，首次证明中国疾控、科研、企业研制的试剂盒和检测方法具有很好的特异性和灵敏性。这也是中国第一次尝试进行埃博拉病毒检测，结果准确率达到100%，第一次“国际大考”获得通过。 据吴旭介绍，目前世界各国对于病毒检测多以生化或免疫的方式，但这都需要病人发病后方能检测并确诊。由于埃博拉病毒发病后传染性极强，这些检测方式对于疫情防控作用十分有限。而普瑞康则是采用分子检测，即通过DNA进行病毒辨识的方式。一旦病人感染埃博拉病毒，即便仍在潜伏期，依然能够精准检测出来，从而做到对病情的早发现、早隔离、早治疗，对于整体疫情防控意义重大。 值得一提的是，为了更好地配合埃博拉病毒检测工作，我国还提供了中国移动检测实验室随同检测队一同运抵非洲。这台位于中塞友好医院的移动P3实验室由3台独立方舱组成，包括主舱、辅舱和中控指挥舱，内部设备包括手套箱隔离器、生物安全柜、自控充气式气囊门、自洁净型传递窗、高压污物灭菌器、高效充气过滤器、高温污水煮沸罐等。实验室按照“四流”(人流、物流、气流、水流)控制理念，实现了对“三废”(废水、废气、废物)的无害化处理。这个实验室也可谓是中国生物安全防控10年发展成就的缩影。 据中国疾病预防控制中心赴塞拉利昂移动实验室检测队队长钱军介绍，队员们平均每天工作时间长达12小时以上，对每个样本检测都要用我国独立研制的试剂盒进行重复检验，确保结果准确无误。移动实验室截至目前无一起机械事故发生，稳定性、安全性、可靠性经受住了实战考验。 2014年9月28日，中国疾控中心驻塞拉利昂移动实验室正式接收塞拉利昂卫生部送来的首批24例样本，第一次批量检样就超过出国前拟定的每天20例的目标。10月23日，中国、南非、美国、加拿大四国援塞实验室的埃博拉样本总检测量180例，中国实验室以69例样本检测量居四国之首，在埃博拉病毒检测能力上实现历史性突破。10月31日，中国实验室检测样本106例，其中阳性61例，单日检测量突破百例，检测总量破千例。截至11月7日，该实验室已完成埃博拉样本检测1435例，占塞拉利昂9月28日以来总样本量的四分之一，其中阳性样本量759例，占同期该国检出阳性样本的30％左右。这标志着中国实验室能力水平已跻身世界先进行列。 “由于我们的高检测准确率，目前塞方已十分信任我们的检测技术。”吴旭说，“截至2014年底，我们已通过检测队向西非捐赠了1.2万人份、价值120万元的埃博拉病毒核酸检测试剂盒。”经过不断优化检测流程、大幅提高检测效率和质量，中国疾控中心驻塞拉利昂移动实验室检测队现已成为塞拉利昂埃博拉疫情防控的重要力量。

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