| 成果简介: |
采用DNA重线技术，以火鸡疱疹病毒（HVT）作为活疫苗病毒载体，将血清1型马立克氏病毒（MDV1）编码具有免疫原性的B抗原（gB）基因，重组于HVT DNA中，构建MDVgB-HIV基因工程MD双价疫苗。该疫苗的研究目的是，提高目前使用的HVT疫苗免疫效力，同时为防制MDV超强毒提供一种可以冻干，便于保存和运输及使用的新型MD疫苗。目前已通过随机筛选的方法，将SV40早期启动子控制的大肠杆菌β-半乳糖苷酶（LacZ）基因插入到火鸡疱疹病毒（HVT）DNA一个约8.0kb BamHI克隆片段的BamHI-HindⅢ亚克隆片段中，构建了HVT转移载体质粒（pHLacZ）。PHLacZ与HVT DNA共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），获得了稳定表达LacZ基因产物的重组HVT （LacZ-rHVT）。LacZ-rHVT经体内、体外传代表明LacZ基因表达稳定；同时证明该亚克隆片段属于HVT复制的非必需基因。在此基础上，将MDV1gB基因插入该亚克隆片段中，构建了含MDVgB基因的HVT转移载体质粒（pHMDV1gB）。Phmdv1gB与LacZ-rHVT DNA共转染CEF，获得了含MDV gB基因的重组HVT（MDV1gB-rHVT）。采用PCR扩增及Dot blot杂交检测证实MDV1 gB基因已插入到HVT中。初步免疫实验结果表明：MDV1gB-rHVT免疫效力高于HVT，其免疫保护效率分别为53。4%和41.9%。但低于HVT+SB1双价疫苗（76.98%）。此外，含有报告基因（LacZ）的重组HVT（LacZ-rHVT）的免疫功能并未因外源基因的插入受到影响，其免疫效率与HVT相近（42.8%）。 |
